基因组pcr总是什么也没有,只有marker带
1、没有扩增出来,或者扩增出来了,但是量不够。 没有扩增出来的话,请参照楼上的 如果条件,操作都没有问题,可以取5ul第一次PCR产物为模板,再建50ul来扩增。这样即使第一次量不够,第二次就会出现条件了。
2、是二聚体。你引物没设计好吧,但也不至于一点目的条带也没有……可以把你想要做的PCR序列给我看看,帮你设计一下。
3、博凌科为-为你解应该是maker的问题。或者是上样的问题。换一个maker吧。
pcr扩增不出来连二聚体也没有的原因
1、有扩增曲线pcr什么都没有的话pcr什么都没有,CT值不是太高在20~30之间属于正常(40个循环)。如果连曲线都没有pcr什么都没有的话就是扩不出来。如果曲线什么都正常的话pcr什么都没有,建议重新配制一块符合自己目的条带大小的琼脂胶重新电泳。
2、可能因素非常多,常见的如下:模板质量太差,引物质量不好,酶的扩增效率不好,反应体系有问题,反应程序有问题。
3、至于第二次扩增,可能是模板降解。改进建议:优化提取 *** ,提高模板浓度。同时也改进一步PCR扩增的条件。PS:新手做PCR,有时候会出现一些莫名奇妙的无法解释的现象。熟练之后,可能就一切都好了。哈哈。
4、弥散的原因比较多:PCR产物是否在扩增结束后立即进行电泳,电泳液是否是新鲜的,如果不是很可能导致扩增产物降解。
5、而PCR扩增对模板的量也是有一个比较合适范围的,pcr什么都没有你可以分别用师兄师姐给的确定能P出来的质粒和基因组DNA,按照他们的经验给的最适模板量,在最适模板量上下设置一个梯度范围去扩增,找到自己认为的最适模板浓度。
【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有?
1、很正常,常见的原因是转化后涂板,转化用的连接产物种有大量基因片段。
2、,引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行 PCR 扩增时,扩增出的 PCR 产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。
3、菌落PCR的假阳性高很可能是因为你做PCR的循环数过大,我们实验室一般对于高拷贝数的质粒,循环数不会超过25个,一般用25个。
4、我觉得用elution buffer没太大的影响,如果你非要觉得不好的话,只能在转化一遍重新提质粒或者抽成干粉再加水。我们一般用水就行。实在不行去测序呀。提的质粒和空质粒可以比较,如果你插入的基因足够大,实在不行多跑跑。