luc标记的必须是活细胞吗
萤光素酶(Luciferase,Luc)常作为“报告蛋白”被用于分子生物学研究中,常见的有萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶和Guassia荧光素酶,他们可以催化荧光素底物发射荧光,作为示踪标签常用于活体成像、药物分析等领域。
其中β-gal半衰期较luc长,应用较为方便。4 比色测定法 1 MTT(或MTS)还原法 本法根据细胞代谢活动与活细胞数直接成比例的原理,通过测定靶细胞代谢活性的减少来反映效应细胞所致靶细胞的死亡。
当然也不是,检测标签、纯化标签、示踪标签,在功能上没有绝对的界限,所有的检测标签也可以用于纯化,只不过需要先制备对应的抗体固定到纯化基质上,比如S标签需要S蛋白固定到纯化树脂上,这就需要购买专门的纯化柱料,十分昂贵。
荧光蛋白在细胞或生物体中给予激发波长就能够发出绿色荧光,显示目的基因的表达情况,且荧光性质稳定,被誉为活细胞探针,不会干扰蛋白检测,快捷,灵敏,非常适用于高通量的药物筛选。
标记基因的作用
标记基因是帮助对转基因生物工程体进行筛选和鉴定的一类外源基因,包括选择标记基因和报告基因。在选择压下,不含标记基因及其产物的非转化细胞和组织死亡,转化细胞由于有抗性而可以继续存活。
标记基因的作用是:“为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。(也就是说是,鉴别和筛选含有目的基因的细胞)”。所以基因工程的第四步“目的基因的检测和鉴定”没有用到标记基因。
标记基因的位置是在运载体(包括质粒、动植物病毒、入噬菌体的衍生物)上。作用是:供重组DNA的检测和鉴定。例子:常见的标记基因有抗生素抗性基因、产生特定颜色的表达产物基因、发光基因等。
质粒中标记基因的作用是有利于对目的基因是否导入进行检测。重组质粒上的标记基因的作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
基因工程中标记基因的作用
标记基因的作用不是目的基因的检测和鉴定,而是鉴别和筛选含有目的基因的细胞。
作用是:供重组DNA的检测和鉴定。例子:常见的标记基因有抗生素抗性基因、产生特定颜色的表达产物基因、发光基因等。
标记基因的功能是为了方便我们更容易挑选被转化的个体。虽然直接检测转化子产物确定转化子从理论上来说可以,但是其数量之多工作量之大成本之高,决定了不可能采取这一方式进行转化个体筛选。
标记基因的作用是鉴定表达载体是否导入受体细胞。因为我们用肉眼看不到,只能通过检测标记基因是否在,就能确定表达载体是否导入受体细胞了。
标记基因的作用:是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因。第三步:将目的基因导入受体细胞转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
六,绿色荧光蛋基因和葡萄糖苷酸酶基因在植物遗传转化中有何作用
也可以用转化体提取液体,外用同位素标记,放射自显影筛选转化体。
提要 从1983年转基因植物诞生以来,植物基因工程发展势头始终不减,现已跃入大规模商业化生产阶段,并成不发展最快、应用潜力最大的生物技术领域之一。
②、它的产物是唯一的,且不会损害受体细胞;③、具有快速、廉价、灵敏、定量和可重复性的检测特性。目前常用的报告基因有氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、荧光素酶基因(luc)、β-葡萄糖苷酸酶基因(gus)等。