pm18t载体酶切用什么酶
1、如果是公司刚买来的是没有的,pMD18-T由pUC18载体改建而成,在pUC18载体的多克隆位点处的Xba I和Sal I识别位点之间插入了EcoR V识别位点,用EcoR V进行酶切反应后,再在两侧的3'端添加“T”而成。
2、大多数情况下不需要,单酶切后为了防止环化需要用碱性磷酸酶处理,但有时候不处理也能得到预期的结果。
3、 *** :用限制性内切酶XcmⅠ酶切,在两端产生T末端,制备的T载体可直接用来克隆用TaqDNA聚合酶产生带A末端的PCR产物。
promega的t4dna连接酶可以连接takara的t载体么
试剂T 载体,T4 DNA 连接酶,连接酶缓冲液,无菌dd Water操作步骤PCR产物与T载体直接连接:(1) 事先将干式恒温仪(或冰盒里t载体连接用什么酶的水)温度设定在14~16°C。
扩增目的基因——PCR。常用试剂盒Promega,takara等 提取载体质粒。根据所需质粒不同用相对应的试剂盒。酶切。根据酶切位点选择相应的酶。限制性内切酶常用NEB,Fermentas等公司的产品 连接。
一般这两者的比例为1:5-1:10之间比较好,还有就是t载体连接用什么酶你的连接体系各种成分是否还有较,连接条件和连接时间是否充分,如果这些都没有问题,那可能就是酶的问题,建议使用TAKARA的连接酶,品质好,连接稳定。
T载体的作用是什么?克隆时为什么要用T载体?
我做过几个克隆,没用过T载体,直接将酶切后纯化的产物进行连接,照样可以连接成功,基本上都会有10-50个克隆长出来。我用的是Sal I和Nde I这两个酶切位点,似乎这两个都是平端的哦。
pGM-T是一种T载体,可以方便地克隆PCR产物。pGM-T克隆就是插入了PCR产物的pGM-T的克隆。T载体是一段线性双链DNA载体,载体的两端3‘末端各有一个额外的T。
T载体是一种克隆载体,也就是用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体,它不能大量表达。
T载体是一种克隆载体,链接后先得到较多的拷贝,可以提高链接表达载体的效率。
pUCm-T载体是一种已经线性化的载体,载体每条链的3’端带有一个突出的T。
t载体就是T-DNA,是一类可以重组到受体生物染色体上的载体,通常被应用于植物的基因重组过程中。