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定容的正确操作,容量瓶正确使用方法和总结(医思倍-《分子生物学实验》之基础试剂的配置操作示范)

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1、定容的正确操作:医思倍-《分子生物学实验》之基础试剂的配置操作示范

LB和SOC液体培养基的配置

1.配置试剂前,用清水洗净器皿,并用蒸馏水涮洗两遍,洗去器皿中的杂质。

2.取2个洗净的三角瓶分别标注SCO和LB。

3.分别称取12.5g LB粉末和15.7g SOC 粉末(海博生物)加入到对应三角瓶中。

4.用量筒从纯水仪中取适量的蒸馏水。加入转子,开启磁力搅拌器,使SOC粉末充分溶解。

5.溶解完毕后呈澄清状态,倒入500mL量筒,用蒸馏水涮洗三角瓶,倒入量筒中,最后补水到500mL刻度线处。

6.倒回至三角瓶中,为了达到灭菌效果,用2个500mL的蓝口试剂瓶分装培养基。

7.LB培养基溶解步骤与上述步骤一致。

8.LB和SOC液体培养基配置完成。

PBS溶液配制

本次使用的PBS配方如下:

NaCl

KCl

NaH2PO4

Na2HPO4

135mM

4.7mM

2mM

10mM

1.使用称量天平进行试剂量取。量取试剂量较少时,可轻抖手臂让粉末少量抖落。

2.取定量超纯水在锥形瓶中溶解试剂粉末。放入干净转子,在磁力搅拌器上搅拌溶解试剂粉末。

3.完全溶解后,使用PH计进行测定,如该溶液的PH在7.2-7.4范围内,不需调节PH。

4.取一只定容瓶,进行验漏,超纯水润洗干净。使用干净玻璃棒将溶液引流入定容瓶。

5.使用超纯水冲洗锥形瓶,将溶液引流入定容瓶,静置片刻,待定容瓶降至室温,使用超纯水定容至刻度线。刻度线与液面下凹面齐平。

6.取干净蓝盖硼硅瓶,使用配置好的溶液对试剂瓶进行润洗。

7.分装PBS溶液。放入高压灭菌锅进行灭菌。

8.PBS溶液配制完成

2、定容的正确操作,容量瓶正确使用方法和总结

容量瓶是细颈梨形平底玻璃瓶,由无色或棕色玻璃制成。带有磨口玻璃塞,颈上有一刻度线。

容量瓶有多种规格,小的有5mL、10 mL 、25 mL、50 mL、100 mL,大的有250 mL、500 mL、1000 mL、2000 mL 等。

容量瓶的容量定义为:在20℃时,充满至刻度线所容纳水的体积,以毫升计。

通常采用下述方法规定弯月面:调节液面使刻度线的上边缘与弯月面的最低点水平相切,视线应在同一水平面。

容量瓶的主要用途是配制准确浓度的溶液或定量的稀释溶液。它常和移液管配合使用,可把配成溶液的某种物质分成若干等份。

准确度级别分为A级和B级,国家规定的容量允差见下表:

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容量瓶使用注意事项

①检查瓶口是否漏水:加水至刻度线,盖上瓶塞,颠倒10次(每次颠倒过程中要停留在倒置状态10秒)以后不应有水渗出(可用滤纸片检查);将瓶塞旋转180°再检查一次。合格后用皮筋或塑料绳将瓶塞和瓶颈上端拴在一起,以防摔碎或与其他瓶塞混淆。

②洗涤的方法:一般是先用自来水洗涤、蒸馏水洗净后即可。污染较重时用铬酸洗液清洗内壁,然后用自来水和纯净水洗净。

③用固体物质配制溶液。

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其他注意事项:

不能在容量瓶里进行溶质的溶解;

容量瓶不能进行加热,如果溶质在溶解过程中放热,要待溶液冷却后再进行转移;

容量瓶只能用于配制溶液。对容量瓶材料有腐蚀作用的溶液,尤其是碱性溶液,不能在容量瓶中长久贮存,配好后应转移到其他干燥容器中密闭存放;

容量瓶用毕应及时洗涤干净,塞上瓶塞,并在塞子与瓶口之间夹一条纸条,防止瓶塞与瓶口粘,连塞与瓶应编号配套或用绳子(橡皮筋)相连接以防止瓶塞丢失、污染或搞错。

容量瓶操作中常见的错误

1.定量转移时洒出溶液;

2.定量转移时丢失烧杯尖嘴处最后一滴溶液;

3.定量转移时因玻棒丢失溶质;

4.未清洗烧杯,或未合并清洗液;

5.定容过量;

6.定容时读数不准确;

7.定容后未摇匀。

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定容时正确读数的方法

定刻度线三要点:

瓶直(容量瓶垂直);

眼平(视线与刻度线水平相切);

逐滴加入。

具体做法:

操作者直立,用左手拇指和中指提起容量瓶瓶颈(注意是捏住瓶口以下、刻度线以上位置),至刻度线与视线水平线相切位置为止,右手持洗瓶向容量瓶内滴入蒸馏水,至接近刻度线处,然后用洗瓶尖嘴处所含液滴逐滴滴入至弯月面与刻度线水平相切。

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