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内容导航:1、缓冲溶液的pH计算和原理(很简单)2、醋酸缓冲液怎么配制 [3、CTAB的作用?4、【询问】氯化铁加入醋酸钠有沉淀,醋酸铁双水解???1、缓冲溶液的pH计算和原理(很简单)
缓冲溶液通常共轭的酸碱对组成,
如醋酸和醋酸钠,草酸氢钠和草酸钠,邻苯二甲酸氢钾和邻苯二甲酸钾等等,
能有效抵御酸碱的少量加入,保持pH的基本稳定。
比如1mol/L醋酸和1mol/L醋酸钠的缓冲对,醋酸的电离和醋酸钠的水解都受到了抑制,
醋酸根离子和醋酸分子的浓度都等于溶液的物质的量浓度。
Ka=c(氢离子)·c(醋酸根)/c(醋酸)
两边取负对数,
-lgka=-lg[ c(氢离子)·c(醋酸根)/c(醋酸)]
pka=pH-lg(c(醋酸根)/c(醋酸))
pH=pKa+lg(c(醋酸根)/c(醋酸))
一般对于酸和盐混合溶液有pH= pKa+lg[共轭碱/共轭酸]
一般对于碱和盐混合溶液有pOH= pKb+lg[共轭酸/共轭碱]
对于上述1mol/L醋酸和1mol/L醋酸钠的缓冲对,
根据计算公式,加水稀释10倍,pH基本不变,仍然约为pH=pKa=4.74,
若加入等量的0.5mol/L盐酸溶液pH=pKa+lg0.5/1.5=4.74-0.47=3.27
若加入等量的0.5mol/L氢氧化钠溶液pH=pKa+lg1.5/0.5=4.74+0.47=5.21,
若纯水加入等量0.5mol/L盐酸溶液,那么pH=-lg0.25=lg4=0.60,由此可知缓冲作用明显。
一般的缓冲溶液的浓度越大,酸碱浓度的比例接近1:1,缓冲效果越好,同时缓冲不是无限的,超过限度上述两个有利于就被破坏了,缓冲范围一般在上下1个pH单位左右。
2、醋酸缓冲液怎么配制 [
醋酸盐缓冲液(pH3.5) 取醋酸铵25g,加水25ml溶解后,加7mol/L盐酸溶液38ml, 用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至3.5(电位法指示),用水稀释至100ml, 即得。 醋酸-锂盐缓冲液(pH3.0) 取冰醋酸50ml,加水800ml混合后,用氢氧化锂调节pH 值至3.0,再加水稀释至1000ml,即得。 醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.6) 取醋酸钠5.1g,加冰醋酸20ml,再加水稀释至250ml, 即得。 醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.7) 取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后,加溴酚蓝指示 液1ml及冰醋酸60~80ml,至溶液从蓝色转变为纯绿色,再加水稀释至1000ml,即得。 醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.8) 取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加 每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液0.5ml,再加水稀释至1000ml,即得。 醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.5) 取醋酸钠18g,加冰醋酸9.8ml,再加水稀释至1000ml, 即得。 醋酸-醋酸钠缓冲液(pH4.6) 取醋酸钠5.4g,加水50ml使溶解,用冰醋酸调节pH值 至4.6,再加水稀释至100ml,即得。 醋酸-醋酸钠缓冲液(pH6.0) 取醋酸钠54.6g,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后,加 水稀释至500ml,即得。 醋酸-醋酸钾缓冲液(pH4.3) 取醋酸钾14g,加冰醋酸20.5ml,再加水稀释至1000 ml,即得。 醋酸-醋酸铵缓冲液(pH4.5) 取醋酸铵7.7g,加水50ml溶解后,加冰醋酸6ml与适 量的水使成100ml,即得。
3、CTAB的作用?
CTAB是一种去污剂,可溶解细胞膜,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中((0.7 mol/L NaCl)是可溶的,当降低溶液盐浓度到一定程度(0.3 mol/L NaCl)时,从溶液中沉淀,通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白,多糖类物质分开。最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA,而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。
步骤
(1) 2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。
(2)取少量实验材料(约300mg)置于研钵中,用液氮磨至粉状。
(3) 加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液,轻轻搅动。
(4) 将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌离心管中,磨碎液的高度约占管的三分之二。
(5)置于65℃的水浴槽或恒温箱中,每隔10 min轻轻摇动,30~60min后取出。
(6)冷却2 min后,加入氯仿-异戊醇(24:1)至满管,剧烈振荡2~3 min(若提取的是总基因组,则不能剧烈震荡。),使两者混合均匀。
(7)放入离心机中10 000 rpm离心10 min,与此同时,将600 ul的异丙醇加入另一新的灭菌离心管中。
(8) 10 000 rpm离心1 min后,移液器轻轻地吸取上清夜,转入含有异丙醇的离心管内,将离心管慢慢上下摇动30 sec,使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物。
(9)10000 rpm离心1 min后,立即倒掉液体,注意勿将白色DNA沉淀倒出,将离心管倒立于铺开的纸巾上。
(10)60 sec后,直立离心管,加入720ul的75%乙醇及80 ul 5 M的醋酸钠,轻轻转动,用手指弹管尖,使沉淀与管底的DNA块状物浮游于液体中。
(11)放置30 min,使DNA块状物的不纯物溶解。
(12)10000 rpm离心1 min后,倒掉液体,再加入800 ul 75%的乙醇,将DNA再洗 30 min。
(13)10000 rpm离心30 sec后,立即倒掉液体,将离心管倒立于铺开的纸巾上;数分钟后,直立离心管,干燥DNA(自然风干或用风筒吹干)。
(14)加入50 ul 0.5 × TE(含RNase)缓冲液,使DNA溶解,置于37℃恒温箱约15 h,使RNA消解。
以上内容参考 百度百科-CTAB法
4、【询问】氯化铁加入醋酸钠有沉淀,醋酸铁双水解???
百度上的醋酸铁,实际上是醋酸亚铁FeAc2,而不是 FeAc3氢氧化亚铁溶度积:Ksp=4.9 ×10^-17,小于氢氧化铁Fe(OH)3溶度积所以并不会水解那么完全,溶液还是可以存在的
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